商品属性：
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货号 |
规格 |
产品名称 |
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A-PJ1040-1000U |
1000U |
HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油) |
储存条件：
HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,无甘油)储存：-20℃ 可保存 3 年。
产品介绍：
末端转移酶（TdT）是一种不依赖于模板的 DNA 聚 合酶，催化脱氧核苷酸结合到 DNA 分子的 3’羟基端。带有 突出、凹陷或平滑末端的单双链 DNA 分子均可作为 TdT 的 底物，加尾长度可达 5~300nt。本酶经电子重构架技术筛选， 使其可以在 45°C 高温下反应，从而避免因 DNA 二级结构造 成的加尾效率下降。 该酶广泛用于 DNA 的 3’末端添加同聚物、利用修饰碱 基（如 ddNTP，DIGdUTP）标记 DNA 3’末端、TdT 介导的 dUTP 缺口末端标记技术（细胞凋亡的原位检测）等试验。
活性定义：37 ℃ 60 分钟内，催化 1nmol dNTP 加入到多聚核苷酸 3’羟基末端中所需的酶量定义为 1 个活性单位
热失活：75°C 20min。
注意事项：
1、适量 EDTA 可使 Terminal Transferase 的活性丧失。
2、金属离子螯合剂，较高浓度的铵根离子、氯离子、碘例子和磷酸根离子均对 Terminal Transferase 活性具有抑制作用。
3、DNA 末端 mol 数的计算，长度为 100bp 的 DNA：1pmol末端 DNA=0.33ng。
HotStart RAPA3G DNA Polymerase 为第三代 DNA 聚合酶，具有 5’-3’外切酶活性，不具有 3’-5’外切酶活性，其 具有*高的杂质耐受性（对乙醇、胍盐、肝素具有极高的耐 受性），因此对于纯度较差的 DNA 模板，该酶仍然可以获得 理想的实验结果。RAPA3G DNA 聚合酶为化学法修饰的 HotStart 版本，其在 50℃以下 100%无活性，只有 95℃条件 下加热 5min 后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有 效抑制非特异性 PCR 扩增，极大的提高了 PCR 扩增特异性 和灵敏度。该酶配有独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到 良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
使用说明：
1. 按照如下组分配制 50 μl PCR 反应体系：注意：（1）在 50 μl 的 PCR 反应体系中 HotStart RAPA3GDNA Polymerase 的用量可在 0.1-0.5 μl 进行调整。（2）Mg2+的浓度通常在 2-4 mM 时可获得理想的扩增结果。
2. qPCR 扩增程序用两步法：
Stage 1: 95℃ 5min
Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 30s 25-40 cycles
注意：由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶，必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。
3. 常规 PCR 三步法程序：
Stage 1: 95℃ 5min
Stage 2: 95℃ 10s
50-60℃（退火） 20s
72℃ 4kb/min 25-40 cycles
Stage 3: 72℃ 5min
注意：由于该酶为化学修饰的热启动 RAPA3G DNA 聚合酶，必须于 95℃加热 5min 才能恢复酶的活性，该热启动步骤不能缩短时间。
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