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荧光定量PCR实验步骤
日期：2025-06-09 03:40
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摘要：
荧光定量PCR实验步骤：
1、配制反应体系：根据试剂盒说明书，将PCR反应所需试剂混合，包括引物、探针、DNA模板、dNTPs、Taq酶等。
2、PCR扩增：将反应体系放入荧光定量PCR仪，按照以下程序进行扩增：
- 变性：95℃，30秒
- 退火：55-65℃，30秒
- 延伸：72℃，30秒
一般为40个循环，每个循环结束后收集荧光信号。
3、数据分析：根据荧光信号的变化，绘制扩增曲线和熔解曲线。通过分析扩增曲线，可以得到目标DNA的初始浓度；熔解曲线可以判断扩增产物是否特异性。
荧光定量PCR实验步骤：
1、配制反应体系：根据试剂盒说明书，将PCR反应所需试剂混合，包括引物、探针、DNA模板、dNTPs、Taq酶等。
2、PCR扩增：将反应体系放入荧光定量PCR仪，按照以下程序进行扩增：
- 变性：95℃，30秒
- 退火：55-65℃，30秒
- 延伸：72℃，30秒
一般为40个循环，每个循环结束后收集荧光信号。
3、数据分析：根据荧光信号的变化，绘制扩增曲线和熔解曲线。通过分析扩增曲线，可以得到目标DNA的初始浓度；熔解曲线可以判断扩增产物是否特异性。