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qPCR试验无Ct值出现原因及解决方法
日期：2025-05-04 00:00
浏览次数：2539
摘要：
qPCR试验无Ct值出现原因及解决方法：
1、检测荧光信号的步骤有误：
一般染料法采用72℃延伸时采集，探针法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
2、引物或探针降解：
可通过PAGE电泳检测其完整性。
3、模板量不足：
对未知浓度的样品应从系列稀释样本的zui高浓度做起。
4、模板降解：
避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
5、反应循环数不够：
一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环，但高于45个循环会增加过多的背景信号。
qPCR试验无Ct值出现原因及解决方法：
一般染料法采用72℃延伸时采集，探针法则一般在退火结束时或延伸结束采集信号。
2、引物或探针降解：
可通过PAGE电泳检测其完整性。
3、模板量不足：
对未知浓度的样品应从系列稀释样本的zui高浓度做起。
4、模板降解：
避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。
5、反应循环数不够：
一般都要在35个循环以上，可根据实验情况增加循环，但高于45个循环会增加过多的背景信号。