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组织来源 |
皮肤组织 |
规格 |
5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
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细胞分类 |
小鼠原代细胞 |
培养条件 |
气相：空气，95%；CO2，5% |
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生长特性 |
贴壁培养 |
细胞形态 |
铺路石状细胞 |
细胞简介：
角质形成细胞在基底层有一亚群，即表皮干细胞，它通过对称或不对称分裂产生短暂扩增细胞，短暂扩增细胞经过几代扩增后便成为终末分化的表皮角质细胞。表皮是一个可以持续自我更新的组织，因此表皮干细胞具有足够的增殖潜力，表皮干细胞不仅在体内平衡和创伤修复中其关键作用，而且是肿瘤发生和基因的主要靶标。
细胞特性：
1）组织来源于实验动物的正常皮肤组织。
2)细胞鉴定：p63与细胞角蛋白-14（CK-14）荧光染色为阳性。
3)经鉴定细胞纯度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、、酵母和。
5)细胞生长方式：铺路石状细胞，不规则细胞，贴壁培养。
推荐培养基：
我们推荐使用 DELF原代 角质形成 细胞培养体系 作为该细胞的培养基。
(1)原代细胞的培养方法
原代细胞的培养也叫初代培养是从供体取得组织细胞在体外进行的培养，是建立细胞系的步，是一项基本技术。原代细胞接近和能反映体内生长特性，适宜用于敏感性试验、细胞分化等实验研究。
① 组织块培养法
组织块培养是常用、简便易行和成功率较高的原代培养方法。其基本方法是将剪成的小组织团块接种于培养瓶(或皿)中，瓶壁可预先涂以胶原薄层，以利于组织块粘着于瓶壁，使周边细胞能沿瓶壁向外生长。
② 消化培养法
③ 悬浮细胞培养法
对于悬浮生长的细胞，如白血病细胞、骨髓细胞、胸水和腹水中的癌细胞和细胞无需消化，可采用低速离心分离，直接培养，或经细胞分层液分离后接种培养。
④器官培养
器官培养是指从供体取得器官或组织块后，不进行组织分离而直接在体外的特定环境条件下培养，器官培养可保持器官组织的相对完整性，可用于重点观察细胞间的联系、排列情况和相互影响，以及局部环境的生物调节作用。
原代细胞的分离方法：
一、悬浮细胞的分离方法
组织材料若来自血液、羊水、胸水或腹水的悬液材料，简单的方法是采用1000r/min的低速离心10分钟。经离心后由于各种细胞的比重不同可在分层液中形成不同层，这样可根据需要收获目的细胞。二、实体组织材料的分离方法
对于实体组织材料，由于细胞间结合紧密，为了使组织中的细胞充分分散，形成细胞悬液，可采用机械分散法（物理裂解）和消化分离法。
（一）机械分散法
特点:简便、快速,但对组织机械损伤大，而且细胞分散效果差,适用于处理纤维成分少的软组织。
（二）消化分离法
组织消化法是把组织剪切成较小团块（或糊状），应用酶的生化作用和非酶的化学作用进一步使细胞间的桥连结构松动，使团块膨松，由块状变成絮状，此时再采用机械法，用吸管吹打分散或电磁搅拌或在摇珠瓶中振荡，使细胞团块得以较充分的分散，制成少量细胞群团和大量单个细胞的细胞悬液，接种培养后，细胞容易贴壁生长。
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