产品名称：禽腺病毒C种4型(FADV-C-4)检测试剂盒（荧光-PCR法）

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

产品组成:

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正热销的产品：
/酵母细胞线粒体粗提分离试剂盒10次人；Hela S3 [HeLaS3]S-羧甲基-L-半胱氨酸

/酵母细胞活性线粒体分离试剂盒10次人胰腺腺泡上皮癌；HPACO-苯并三氮唑-N

/酵母细胞高质纯化线粒体分离试剂盒10次人T白血病；HuT 78二氢麻醉椒苦素 Dihidromethysticin

纯化线粒体蛋白质浓度定量测定试剂盒20次人肺鳞癌；NCI-H520人血管**素4（ANG-4）ELISA试剂盒,

动物血小板线粒体粗提分离试剂盒10次人前列腺癌高转移株；PC-3M IE8小鼠Ⅰ型胶原N末端肽（NTX）ELISA试剂盒,

动物血小板活性线粒体分离试剂盒10次人前列腺癌低转移株；PC-3M-2B4小鼠抗内皮抗体（AECA）ELISA试剂盒,

动物血小板高质纯化线粒体分离试剂盒10次人肺巨癌高转移株；PG-BE1小鼠心肌营养素1（CT-1）ELISA试剂盒,

动物全血线粒体粗提分离试剂盒10次人肺巨癌低转移株；PG-LH7大鼠白介素27（IL-27）ELISA试剂盒,

动物全血活性线粒体分离试剂盒10次人结直肠腺癌；SW620 [SW 620；SW-620]心纳素（ANF）ELISA试剂盒--动物，人

动物全血高质纯化线粒体分离试剂盒10次人脑星形胶质母瘤；U-87 MG [U87MG；U87 MG]基质金属蛋白酶抑制因子2（TIMP-2）ELISA试剂盒--动物，人

纯化线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次人肺癌；A-427 [A427]Ⅱ型胶原螺旋肽（HELIX-Ⅱ）ELISA试剂盒--动物，人

动物硬组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次人胰腺癌；AsPC-1轮状病（RV）IgM ELISA试剂盒--动物，人

动物软组织线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次人侵袭性脉络膜黑色素瘤；C918戊型肝炎病IgM（HEV-IgM）ELISA试剂盒--动物，人

动物细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次人髓母瘤；Daoy改良BPLS琼脂

/酵母细胞线粒体可溶性总蛋白制备试剂盒20次人导管癌；HCC38吖啶黄素每支添加于225ml HB4150、HB4192中（SN、GB标准）
禽腺病毒C种4型(FADV-C-4)检测试剂盒（荧光-PCR法）P-selectin  人可溶性P-选择素30×100mm G型号

COX-2(human)  人前列腺素氧化环化酶225×100mm HF254型号

PDGF-AB  人血小板衍生生长因子薄层层析硅胶板 25×100mm GF254型号 70片/盒

PDGF-BB  人血小板衍生生长因子-BB25×100mm H型号

PGE1  人前列腺素1薄层层析硅胶板 25×100mm G型号 70片/盒

PGE2  人前列腺素250×200mm GF型号

P53  人P53蛋白50×200mm HF型号

Osteocalcin  人骨钙素异丁酰乙酸乙酯 98%