产品名称：小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法）

产品特点：

1、公司产品仅用于科研不需要单独纯化线粒体，柱式法纯化，操作简单快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克组织一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本产品只适合于动物材料，不适合于植物材料，因为植物线粒体DNA一般都十分巨大,非常难提。

操作流程:

1.从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。

2.设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；

3.样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

5.弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。

产品组成:

下列是公司正热销的产品：

大鼠视黄醇结合蛋白4（RBP4）elisa定量检测试剂盒

大鼠端粒酶（TE）elisa定量检测试剂盒

小鼠组织蛋白酶B（CTSB）elisa定量检测试剂盒

小鼠胆囊收缩素八肽（CCK-8）elisa定量检测试剂盒

大鼠蛋白磷酸酶（PP）elisa定量检测试剂盒

小鼠肾上腺髓质素（ADM）elisa定量检测试剂盒

大鼠蛋白质二硫键异构酶A3（PDIA3）elisa定量检测试剂盒

大鼠蛋白激酶C-θ（PKCq）elisa定量检测试剂盒

大鼠白介素1可溶性受体Ⅱ（IL-1SRⅡ）elisa定量检测试剂盒

大鼠丝氨酸蛋白酶1（PRSS1）elisa定量检测试剂盒

小鼠可溶性CD14（sCD14）elisa定量检测试剂盒

小鼠成纤维生长因子23（FGF23）elisa定量检测试剂盒

小鼠表皮调节素（EREG）elisa定量检测试剂盒

大鼠阻抑素（PHB）elisa定量检测试剂盒

大鼠血管内皮生长因子受体1（FLT1/VEGFR1）elisa定量检测试剂盒
小肠结肠炎耶尔森氏菌（PCR-荧光探针法）TNF- Beta(Tumor Necrosis Factor- Beta)  肿瘤坏死因子-β抗原二, 含稳定剂铜屑, 98%

TNFAIP1(Tumor necrosis factor-alpha-induced protein 1)  肿瘤坏死因子α诱导蛋白1抗原N,N-二乙基氯乙酰 98%

TP53(tumor protein p53； Li-Fraumeni syndrome)  抗肿瘤P53抗原二烯基 98%

TP I (topoisomerase I )  拓普西异构酶Ⅰ抗原二异 98%

TOPO II Alpha/DNA TP II Alpha (DNA topoisomerase II Alpha)  DNA拓普西异构酶Ⅱ抗原4,6-二甲氧基-2-甲磺酰基嘧啶 98%

TPH (Trptophan Hydroxylase)  色氨酸羟化酶(多肽)3,6-二硫杂-1,8-辛二  97%

TRA16 (Testicular orphan nuclear receptor-4 (TR4)-associated protein)  受体相关蛋白/孤儿素受体相关蛋白(抗原)N,N-二苄基羟基 98%

TRADD(TNF receptor 1 associated via death domain)  有死亡区的肿瘤坏死因子受体1相关蛋白抗原1,3-二乙基脲 97%

使用方法:

一:培养细胞预处理

1. 用自备的0.25%胰酶消化液处理约107个培养细胞,离心收集后弃上清。

2. 用PBS或TBS等缓冲液洗涤细胞两次,离心得到的细胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:组织细胞预处理

3. 用剪刀将1g新鲜的动物组织剪碎(芝麻大小*),转移到1.5mL塑料离心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用冻存的动物组织,因为冻凝过程中形成的冰晶会将线粒体刺破,使其DNA释放出来被胞浆中的DNA酶降解,影响回收率。

三:血液预处理

4. 将3-5mL抗凝外周血静置30分钟或低速离心5分钟,取白细胞层。

5. 用自备PBS洗涤白细胞两次,得到的白细胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式动物线粒体DNA提取试剂盒(PCR级)四:mtDNA提取

5.在细胞沉淀或剪碎的组织中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的组织,不要等成块的组织溶解即可继续下步操作。

6. 加入250μL常温的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前须37℃加热溶解后冷却到室温方可使用),温和反复颠倒混匀10次。千万不要剧烈振荡。

7. 冰上放置6-8分钟。注意不要超过8分钟。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,温和混匀4-6次,可见白色沉淀物产生,然后放冰上放置20-25分钟。

9.室温12000~15000g离心10分钟,小心将上清液转移到离心吸附柱中。由于此时的溶液比重较大,有时候出现沉淀漂浮是正常现象,取上清时避开漂浮的沉淀即可。

10. 静置5分钟以让DNA与离心吸附柱充分结合,此步十分重要。

11.室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中的废液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室温12000~15000g离心1分钟,弃收集管中废液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要将盖拧紧存放,否则乙醇会挥发。

13. 重复上步1次。

14.室温12000~15000g离心1分钟,甩干残留液体。此步不能省略,否则残留乙醇会影响DNA的后续使用(如DNA上样时不能沉淀到加样孔中)。

15. 将离心吸附柱置于一个新的1.5mL塑料离心管中,加入30-50μL 65-80℃预热的DNA洗脱液,室温放置2分钟。常温的DNA洗脱液也可以用于洗脱,但产量稍微有所降低。

16.室温12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司离心吸附柱结合DNA能力较强,如果再加30-50μL DNA洗脱液到离心吸附柱中,往往还能洗脱下很多mtDNA(相当于次洗脱的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液来洗脱。

18. 12000~15000g离心1分钟,离心管底溶液即线粒体DNA。每107个动物细胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克组织一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要浓缩,可以使用本公司的核酸浓缩剂。

19. 由于DNA机械断裂,电泳时DNA可能不呈现专一的带,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。