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PCR反应基本步骤
日期：2025-06-09 01:55
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摘要：
PCR反应基本步骤：
变性：根据DNA高温变性的原理，将反应体系温度升至变性温度（高于模板熔点，约95℃），使目的DNA双链裂解成PCR模板（单链）。[95℃，30s]
退火：将反应体系温度骤降至退火温度（低于引物熔点约55℃），是PCR引物与PCR模板3’端杂交，称为退火。[55~65℃，30s]
延伸：将反应体系温度升至延伸温度（约72℃），DNA聚合酶按照碱基配对原则在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互补链，使目的DNA拷贝数增加1倍。[72℃，30~60s]
PCR反应基本步骤：
变性：根据DNA高温变性的原理，将反应体系温度升至变性温度（高于模板熔点，约95℃），使目的DNA双链裂解成PCR模板（单链）。[95℃，30s]
退火：将反应体系温度骤降至退火温度（低于引物熔点约55℃），是PCR引物与PCR模板3’端杂交，称为退火。[55~65℃，30s]
延伸：将反应体系温度升至延伸温度（约72℃），DNA聚合酶按照碱基配对原则在引物3’端以5’→3’方向催化合成PCR模板新的互补链，使目的DNA拷贝数增加1倍。[72℃，30~60s]